實(shí)時(shí)定量熒光PCR（Real-time PCR）方法是檢測細(xì)胞、組織或微生物中基因表達(dá)變化，如不同藥物濃度處理后相關(guān)基因表達(dá)水平高低的常用手段之一，與常規(guī)PCR（RT-PCR）相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有極高的靈敏度、高度的重復(fù)性和極佳的特異性，且后續(xù)處理無EB等有害物質(zhì)的污染，已成為現(xiàn)階段國際公認(rèn)的核酸分子定量檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，在基因表達(dá)研究和臨床疾病檢測等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。

服務(wù)需知：

1、為保證實(shí)驗(yàn)的精確性，請客戶在取樣前與我們?nèi)〉寐?lián)系，我公司會派專人去協(xié)助取樣；客戶也可直接提供純化好的總RNA/DNA（≥ 3 ug/ 樣本）。

2、請通過 E-mail 提供已知的全長基因序列或GeneBank號。

3、希望提供詳細(xì)的背景資料：生物物種信息（Human、Mouse、Rat等），DNA/ RNA來源、基因豐度等。

熒光定量PCR操作流程：

1、根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。

2、提取DNA/ RNA，紫外分光光度計(jì)檢測其完整性和濃度，反轉(zhuǎn)錄酶將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。

3、引物預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選處特異性最強(qiáng)的引物。

4、熒光定量PCR，采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法，結(jié)合內(nèi)參與目的基因的CT值，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

5、實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果（含軟件分析結(jié)果）及引物等相關(guān)實(shí)驗(yàn)材料。 

熒光定量PCR收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

內(nèi)參β-actin和目的基因P53的擴(kuò)增曲線

內(nèi)參β-actin和目的基因P53的溶解曲線

內(nèi)參β-actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度