CELLiGENT 3D 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝

Catalog No. CG0201-2、CG0201-4、CG0201-10
Specification 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit Storage 4℃保存、 保存兩年

一、產(chǎn)品描述
CELLiGENT 3D 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含整套膠體與試劑，可 3D 細(xì)胞培養(yǎng)與微環(huán)境應(yīng)用等；本試劑盒操作便利且可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)測試；高分子膠體可快速形成水凝膠， 建議操作此培養(yǎng)膠體前詳讀此使用指南。
（CELLiGENT 3D 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝為植物來源，無動物成分）

二、應(yīng)用

· 三維細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗

· 適合用于三維細(xì)胞藥物篩檢平臺

三、樣本類型

· 腫瘤細(xì)胞系

四、試劑盒組分

五、使用步驟：

A.試劑制備
A 基質(zhì)膠：將A 基質(zhì)膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘， 確認(rèn)完全融解.
C 緩沖溶液(1X)制備：使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細(xì)胞培養(yǎng)液(例如： 無血清 DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B. CELLiGENT 3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備

   全部步驟需要在無菌環(huán)境內(nèi)操作，操作步驟如下：

1. 將 24孔培養(yǎng)板放置于冰上預(yù)冷。

2. 細(xì)胞計數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5 毫升 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)基均勻混合，并與 0.5 毫升 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細(xì)胞密度 105~107cells/mL。注：請選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進(jìn)行試驗。

3. 取 20-40 微升步驟 2 的混合液滴于 步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上，膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。 注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認(rèn)。

4. 待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液，并蓋過步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5. 待 15 分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長之培養(yǎng)基溶液。

6.  將含有細(xì)胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行 7~14 天的培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞球體的形成，按正常培養(yǎng)基更換頻率進(jìn)行更換操作。

C、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序
      小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用 1X PBS 進(jìn)行清洗。小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應(yīng) 5 分鐘。溫和的用 1 毫升移液管吸取，直到膠滴完全溶解。將含有細(xì)胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用 1000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 10 分鐘，移除上清液體并收集細(xì)胞球體做分析。

D、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序

      在分離單細(xì)胞前，先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進(jìn)行操作

1. 添加 trypsin-EDTA 并與收集的細(xì)胞球體于 37°C 混合反應(yīng)。

2. 用 1 毫升移液管混合，直到細(xì)胞體完全分解。

3. 待細(xì)胞球體完全分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心 10 分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。