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  • 產(chǎn)品名稱: PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Erase
  • 產(chǎn)品貨號:RR047A
  • 產(chǎn)品規(guī)格:20 μl反應(yīng)×100 次
  • 產(chǎn)品品牌:Takara
  • 供應(yīng)商:
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地: 日本 產(chǎn)品價格:¥詢價
  • 產(chǎn)品說明書:
  • 保存于運(yùn)輸說明:
  • -20℃
  • 詳細(xì)信息:
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    ■ 制品內(nèi)容 (20 μl反應(yīng)×100次量)

    1. gDNA Eraser

    100 μl
    2. 5×gDNA Eraser Buffer*1
    200 μl
    3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl
    4. 5×PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3 400 μl
    5. RT Primer Mix*4 400 μl
    6. RNase Free H2O 1 ml×2
    7. EASY Dilution (for Real Time PCR)*5 1 ml
     

    *1 5×gDNA Eraser Buffer在反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)前使用,請務(wù)必進(jìn)行基因組DNA的除去反應(yīng)。
    *2 含有RNase Inhibitor。
    *3 含有dNTP Mixture。
    *4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。
    *5 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時梯度稀釋cDNA或RNA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀釋時,由于受Microtube吸附作用等的影響,往往不能準(zhǔn)確地進(jìn)行稀釋,導(dǎo)致實驗結(jié)果精度降低。使用本制品時,即使稀釋至低濃度也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確地稀釋,容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。EASY Dilution也可以單獨(dú)購買 (Code No.: 9160)。 
    注意:EASY Dilution請與本公司Real Time PCR試劑組合使用,對于其他公司的同類制品的適用性本公司尚未進(jìn)行確認(rèn)。 

     
    ■ 制品說明
     

    為了準(zhǔn)確地進(jìn)行基因表達(dá)量分析,必須滿足只有cDNA作為模板檢出的先決條件,但Total RNA中常常混有基因組DNA,并可以直接作為PCR反應(yīng)的模板進(jìn)行擴(kuò)增,因此會造成解析結(jié)果不準(zhǔn)確。為了避免這種情況發(fā)生,通常將檢測用引物設(shè)計在內(nèi)含子前后的外顯子上,使基因組DNA得不到擴(kuò)增。但是,此方法不適合具有單個外顯子的基因或兩個外顯子之間所跨的內(nèi)含子過小的基因,同時當(dāng)基因組上有偽基因存在時、或設(shè)計引物對基因組有非特異性擴(kuò)增時、以及基因信息沒被完全解析的生物種等也同樣不適合于本方法。在這種情況下,我們常常需要對Total RNA樣品進(jìn)行DNase I處理,以除去殘存的基因組DNA。而DNase I處理通常要進(jìn)行復(fù)雜的純化操作,同時會造成RNA的降解和損失。 
    PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因組DNA進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)的專用反轉(zhuǎn)錄試劑。Kit中使用了具有較強(qiáng)DNA分解活性的gDNA Eraser,通過42℃,2 min即可除去基因組DNA。同時由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制DNA分解酶活性的組分,經(jīng)過gDNA Eraser處理后的樣品可以直接進(jìn)行15 min的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA,因此,20 min內(nèi)即可迅速完成從基因組DNA去除到cDNA合成的全過程。 
    使用本制品合成的cDNA適用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探針分析法,可以根據(jù)實驗?zāi)康?,選擇與SYBR® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)、Premix Ex Taq (Probe qPCR) 等定量試劑組合使用。
    注意:Takara Bio使用SYBR® Green I 作為研究試劑已得到Molecular Probes Inc.的許可。SYBR®為 Molecular Probes Inc.的注冊商標(biāo)。

     
    ■ 保存
    -20℃。
     
    ■ 試劑盒特長

    1. 含有去除基因組DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因組DNA。
    2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反應(yīng)用模板cDNA,是進(jìn)行2 Step Real Time RT-PCR反應(yīng)的******試劑。
    3. 反轉(zhuǎn)錄引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均勻合成樣品中的各種cDNA。 
    4. 本制品提供了SYBR Green®分析法和TaqMan®探針分析法各自最適反應(yīng)體系,可以根據(jù)分析方法選擇體系。? 
    (1) 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RT Primer Mix的用量。 ? 
    (2) 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中總RNA的用量。 

     
    5. Real Time RT PCR定量需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的條件就是需要將總RNA和反轉(zhuǎn)錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用
        水或TE Buffer稀釋時,由于模板濃度低不穩(wěn)定,因而會縮小曲線范圍,結(jié)果精度降低。本制品中附加了標(biāo)準(zhǔn)曲線制作用稀釋液
        EASY Dilution (for Real Time PCR) ,將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋,容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確
        定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
     
    ■ 注意事項

    1. 當(dāng)同時需要進(jìn)行數(shù)次反應(yīng)時,應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再

        分裝到每個反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確,減少試劑損失,避免重復(fù)分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或
        實驗之間產(chǎn)生的誤差。
    2. gDNA Eraser和PrimeScript® RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,
        粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取。同時,要使用精確、量程適合的移液槍,并且不要使Tip插入液面過深,否則會因Tip壁粘著造成
        損失,而使酶量不足。
    3. 5×gDNA Eraser Buffer和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time) 在使用前需Vortex輕輕離心。 
    4. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。
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